产品货号：
KFS305
中文名称：
细胞自噬检测试剂盒(荧光显微镜，MDC法)
英文名称：
产品规格：
100T
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
本试剂盒提供便捷成套的MDC染色试剂。单丹磺酰尸胺(monodansylcadaverin,MDC)是一种荧光色素，其检测激发滤光片波长355nm。阻断滤光片波长512nm。MDC是一种嗜酸性染色剂，通常被用作检测自噬体形成的特异性标记染色剂。
细胞自噬(autophagy)是细胞受到刺激后吞噬自身的细胞质或细胞器，最终将吞噬物在溶酶体内降解的过程，自噬体(autophagosome)为双层膜包被的圆形或椭圆形结构，内含细胞质、长寿蛋白质和异常蛋白聚集物，损伤或多余细胞器如线粒体、粗面内质网和微体、病毒和细菌等。
| 组分 | 规格 |
| MDC染液 | 1mL |
| 10×Wash Buffer | 15mL |
| Collection buffer | 10mL |
保存：2～8℃，避光，有效期1年。
100T是针对24孔细胞爬片(荧光显微镜观察)，如果您通过荧光酶标仪读数检测结果，本试剂盒可以做30～50T。
- 10×Wash Buffer临用前，以去离子水稀释至1×Wash Buffer后，再使用。
- MDC染液有毒，操作时请戴手套。
- MDC单染
- 悬浮细胞：
- 800g，5min离心收集细胞，加入300μL 1×Wash Buffer洗一次，加适量的1×wash buffer重悬，调节细胞浓度约为106/mL。
- 吸取90μL的细胞悬液至新的eppendorf管中，加入10μL的MDC染液，轻轻混匀；
- 室温避光染色15～45min后，800g，5min离心收集细胞，1×Wash Buffer，300μL洗三次，再以100μL的collection buffer重悬。
- 将重悬液滴加于载玻片上，加盖玻片；
- 荧光显微镜，激发滤光片波长355nm。阻断滤光片波长512nm观察，计数、拍照。
- 800g，5min离心收集细胞，加入300μL 1×Wash Buffer洗一次，加适量的1×wash buffer重悬，调节细胞浓度约为106/mL。
- 贴壁细胞：
- 贴壁细胞于24孔板内爬片至所需要的汇合度，弃去培养液，加入300μL 1×Wash Buffer洗二次。
- 以1×Wash Buffer：MDC染色液体积比=9:1稀释染色液至工作浓度，计算一次实验所需要的染色液体积，配制MDC染色工作液，轻轻混匀；
- 每孔加入100μL MDC染色工作液，室温避光染色15～45min后，弃去染色液，以1×Wash Buffer，300μL洗三次，再以100μL的collection buffer覆盖细胞爬片，荧光显微镜，激发滤光片波长355nm。阻断滤光片波长512nm观察，计数、拍照。
注意：此步骤在1×Wash Buffer洗涤完成之后以防淬灭封片剂封片后在荧光显微镜下检测。
- 贴壁细胞于24孔板内爬片至所需要的汇合度，弃去培养液，加入300μL 1×Wash Buffer洗二次。
- 悬浮细胞：
- 与EB双染(选做步骤)
- 收集细胞，1×Buffer A洗一次，加适量的1×Buffer A重悬，调整细胞浓度约为106/mL；
- 吸取90μL的细胞悬液，加入EB染料(0.2μM)和MDC染液各10μL，轻轻混匀；(EB：ex-530nm，em-590nm)
- 滴加于载玻片上，室温避光染色15～30min后，加盖玻片；
- 荧光显微镜，滤光片512nm观察，计数、拍照。
- 收集细胞，1×Buffer A洗一次，加适量的1×Buffer A重悬，调整细胞浓度约为106/mL；
相关搜索：细胞自噬检测试剂盒(荧光显微镜，MDC法)，细胞自噬染色检测试剂盒，细胞自噬检测试剂盒